MÉTODO PARA OBTENÇÃO DA ENZIMA L-ARABINOSE ISOMERASE (L- AI) RECOMBINANTE POR EXPRESSÃO HETERÓLOGA EM ESCHERICHIA COLI UTILIZANDO SORO DO LEITE COMO INDUTOR NO OPERON LAC

IPC Classification

Abstract

MÉTODO PARA OBTENÇÃO DA ENZIMA L-ARABINOSE ISOMERASE (L- AI) RECOMBINANTE POR EXPRESSÃO HETERÓLOGA EM ESCHERICHIA COLI UTILIZANDO SORO DO LEITE COMO INDUTOR NO OPERON LAC. A presente invenção apresenta estratégias para a expressão heteróloga da proteína recombinante L-arabinose isomerase de Enterococcus faecium DBFIQ E36, através do método de autoindução, voltando-se para possibilitar sua disponibilidade comercial. Para a expressão da proteína recombinante utilizando o meio de autoindução, foram empregados glicose e glicerol como fontes de carbono e energia, e soro de leite como agente indutor. O soro de leite é considerado um subproduto da indústria de laticínios e tem se destacado como uma promissora matéria prima aplicada em processos biotecnológicos por apresentar elevadas concentrações de lactose, atuando como agente indutor. A concentração ideal de lactose, derivada do soro de leite, para a expressão da enzima L-arabinose isomerase (L-AI) em meio de autoindução foi 4g. L -1 . A L-AI expressa em frascos agitados atingiu uma atividade catalítica de 3,78 ± 0,00 U.mL -1, com 11h de cultivo. O extrato purificado apresentou atividade catalítica de 2,08 ± 0,01 U.mL - 1 e atividade específica de 2,38 U.mg -1 . Visando o aumento de escala, a expressão da enzima em biorreator (5L) se deu a partir de 4h de cultivo. Nessas condições, são apresentados protocolos promissores e inovadores para a expressão efetiva da proteína recombinante L-AI.