SISTEMA CELULAR REPÓRTER PARA A ENZIMA HUMANA CYP3A4 DO CITOCROMO P450

IPC Classification

Abstract

SISTEMA CELULAR REPÓRTER PARA A ENZIMA HUMANA CYP3A4 DO CITOCROMO P450 O sistema repórter CYP3A4 ZsGreenl-1 construído por transfecção de células Caco-2 foi desenvolvido para avaliar a modulação da expressão da enzima CYP3A4, após exposição à xenobióticos. O vetor utilizado para a transfecção foi desenvolvido inserindo a sequênciada região promotora do gene da enzima CYP3A4 no vetor ZsGreenl-1, que contém o gene para expressão da proteína GFP, assim submetendo a expressão desta proteína à regulação pelo promotor do gene da enzima CYP3A4. Desta forma, alterações na expressão gênica daenzima CYP3A4 alteram também a expressão da GFP nas células transfectadas. A GFP pode ser quantificada via citometria de fluxo, uma metodologia de análise quantitativa sensível, relativamente simples, de baixíssima subjetividade, rápida e de baixo custo para estudos em largaescala. O sistema repórter CYP3A4 ZsGreenl-1 desenvolvido se mostrou funcional, permitindo a avaliação da modulação da expressão da enzima CYP3A4 por xenobióticos por meio da quantificação da expressão da GFP. Assim, o sistema aqui descrito pode ser empregadopara triagem, desenvolvimento de novos fármacos e estudos de interações medicamentosas envolvendo a enzima do citocromo P450,CYP3A4, sendo esses estudos de grande interessa para a indústria farmacêutica.