KIT E MÉTODO DE ANÁLISE BASEADO EM DIGESTÃO COM ENZIMAS DE RESTRIÇÃO DE PRODUTOS DE AMPLIFICAÇÃO POR PCR PARA DIFERENCIAR CEPAS VACINAIS E DE DESAFIO (DE CAMPO) DE SALMONELLA ENTERITIDIS

IPC Classification

Abstract

Kit e método de análise baseado em digestão com enzimas derestrição de produtos de amplificação por PCR para diferenciarcepas vacinais e de desafio (de campo) de Salmonella EnteritidisA presente invenção se refere a um procedimento in vitro que permite a diferenciação de cepas de campo das vacinais atenuadas de Salmonella Enteritidis comercializadas no Brasil 441/014 (ade/his) e Sm24/Rif1/Ssq e suas homólogas (presentes nas vacinas Gallivac SE/ Boehringer Ingelheim e AviPro Salmonella Vac E/ Elanco, respectivamente). O procedimento é baseado na técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR), com a amplificação de regiões dos genes nhaA e kdpA comuns a todas as cepas de Salmonella Enteritidis. A diferenciação é realizada pela digestão com enzimas de restrição, que reconhecem regiões de polimorfismo dos dois alvos moleculares, após a amplificação por PCR. A avaliação dos resultados é realizada por eletroforese em gel de poliacrilamida ou agarose e visualização das bandas dos fragmentos de restrição. Este protocolo permite a monitoria de programas de vacinação com cepas vivas com rapidez e sensibilidade, possibilitando a implementação de medidas sanitárias nos lotes de aves infectados, além de contribuir com a eficiência e redução da falha de vacinação.