MÉTODO DE HPLC DE FASE REVERSA PARA ANÁLISE DE INTERFERON-a2 DIRETAMENTE DE FLUIDO PERIPLÁSMICO

IPC Classification

Abstract

MÉTODO DE HPLC DE FASE REVERSA PARA ANÁLISE DE INTERFERON-a2 DIRETAMENTE DE FLUIDO PERIPLÁSMICO. Um método de cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (RP-HPLC) é descrito para análise de interferon a-2a e interferon a-2b. Esse método permite a análise qualitativa e quantitativa do interferon recombinante presente no extrato bruto (fluido periplásmico) proveniente do choque osmótico, assim como nas preparações mais puras ou em formulações farmacêuticas. O método foi desenvolvido e validado quanto à exatidão, precisão, linearidade, sensibilidade e especificidade. No ensaio de recuperação, obteve-se um erro sistemático (bias) menor que 1%, e determinações quantitativas intra-dia e inter-dia apresentaram desvios padrão relativos sempre < 4 %, enquanto que a sensibilidade experimental foi de 0,3 µg (RSD = 5 %). Além disso, o método também mostrou ser adequado para identificar e quantificar formas glicosiladas, não glicosiladas, isoformas oxidadas e moléculas de interferon a2 com resíduo de metionina no N-terminal. Esta metodologia permite a aplicação rápida de RP-HPLC como uma ferramenta para monitorizar a produção e qualidade de interferon logo após, ou ainda durante a fermentação ou durante o processo de purificação ("downstream").