PROCESSO DE RENATURAÇÃO DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES A PARTIR DE AGREGADOS PROTEICOS INSOLÚVEIS

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Abstract

PROCESSO DE RENATURAÇÃO DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES A PARTIR DE AGREGADOS PROTEICOS INSOLÚVEIS A presente invenção descreve um processo de renaturação de proteínas que utiliza alta pressão e pH alcalino para a obtenção de altos rendimentos de proteínas solúveis, estrutura terciária nativa e biologicamente ativas a partir de agregados insolúveis, os corpúsculos de inclusão. A solubilização dos agregados insolúveis é realizada em pressões entre 1,5 e 3,5 kbar e em pH entre 9,0 e 12,0. Opcionalmente arginina ou reagentes de oxidação-redução podem ser utilizados para aumentar a solubilidade da proteína ou para estimular a formação de pontes dissulfeto, respectivamente. Após incubação nesta condição durante períodos que variam entre 30 minutos e 2 horas, a pressão é abaixada para a pressão atmosférica. Alternativamente, a pressão pode ser abaixada para níveis mais baixos de pressão, entre 0,3 a 0,8 kbar, e incubada por períodos de 30 minutos a 48 horas. Após descompressão, o pH da proteína solubilizada é abaixado e tipicamente a proteína é recuperada com elevados rendimentos e devidamente enovelada. O processo inteiro de solubilização e renaturação pode ser realizado a partir de 1 hora e pode-se utilizar concentrações proteicas relativamente altas (até 1,5 mg/ml). O processo é aplicável a corpúsculos de inclusão ou a outro tipo de proteínas agregadas insolúveis ou solúveis. Em uma modalidade não limitativa da invenção, é descrito o processo de renaturação da proteína não estrutural 1 (NS1) do vírus da zika com altos rendimentos (80%) pela solubilização em alta pressão hidrostática e pH alcalino.