PRODUÇÃO DOS ANTÍGENOS TES30 E TES120 DE TOXOCARA CANIS EM PICHIA PASTORIS PARA USO COMO IMUNOBIOLÓGICO

IPC Classification

Abstract

PRODUÇÃO DOS ANTÍGENOS TES30 E TES120 DE TOXOCARA CANIS EM PICHIA PASTORIS PARA USO COMO IMUNOBIOLÓGICOToxocara canis é o principal agente da toxocaríase humana, um problema negligenciado de saúde pública. O antígeno TES é usado no imunodiagnóstico desta parasitose, porém sua obtenção é laboriosa, improdutiva e com baixas taxas de concordância entre diferentes lotes de cultivo de larvas. Como alternativa, o uso de antígenos recombinantes baseados em proteínas específicas encontradas no antígeno TES vem se destacando. Nesta patente, descrevemos a produção e avaliação da antigenicidade dos antígenos TES30 e TES120 de T. canis produzidos em Pichia pastoris. Genes sintéticos foram sintetizados e clonados no vetor pPICZ(Alfa)B, gerando os clones recombinantes pPICZ(Alfa)B/tes30 e pPICZ(Alfa)B/tes120. Os clones foram cultivados em BMGY e a expressão dos antígenos induzida com 0,5% e 1% de metanol, respectivamente. Os antígenos recombinantes foram caracterizados por SDS-PAGE e Western blot. Para testar a sensibilidade e especificidade dos antígenos recombinantes, foi realizado um ELISA indireto com um painel de soros humanos padrões e conjugado anti-IgG humana. Os antígenos rTES30 e rTES120 apresentaram em torno de 40 kDa e 70 kDa, respectivamente, sugerindo que foram glicosilados. Ambos foram reconhecidos por soros positivos para toxocaríase, sugerindo que são antigênicos. No ELISA indireto, o rTES30 apresentou especificidade de 97,5% e sensibilidade de 22,5%, enquanto que o rTES120 95% e 30%. Os antígenos recombinantes produzidos apresentam potencial de uso como imunobiológicos.