PLASMÍDEO, VÍRUS RECOMBINANTE EXPRESSANDO PROTEÍNA SEQUESTRANTE DE IP3 NO NÚCLEO CELULAR E USOS

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Abstract

PLASMÍDEO, VÍRUS RECOMBINANTE EXPRESSANDO PROTEÍNA SEQUESTRANTE DE IP3 NO NÚCLEO CELULAR E USOS A presente invenção descreve uma ferramenta útil para o monitoramento e estudo do fluxo de cálcio mediado pelo mensageiro inositol 1,4,5-trifosfato (IP3), particularmente no núcleo celular. Esta ferramenta consiste em um plasmídeo lentiviral, capaz de promover, na célula alvo, a expressão da proteína de fusão cuja sequência compreende: a porção ligante ao IP3 do receptor IP3R (SEQ ID Nº: 1 ), responsável por ligar-se ao IP3 competindo com o receptor nativo deste mensageiro na célula; um sinal de localização nuclear (NLS) (SEQ ID Nº: 2), responsável por direcionar a construção para o núcleo da célula; e uma proteína fluorescente, mais precisamente a proteína fluorescente vermelha (dsRed) (SEQ ID Nº: 3), que permite a verificação visual da localização desta proteína no interior da célula. Esta construção, por meio do emprego do esqueleto de um plasmídeo lentiviral, permite a geração de uma partícula viral que, quando utilizada para infectar a célula alvo, garante a integração do DNA recombinante ao genoma da célula, produzindo, assim, uma linhagem celular recombinante e estável, o que possibilita sua utilização em experimentos mais longos, como aqueles de diferenciação de células tronco