MÉTODO DE OBTENÇÃO DO VETOR DE EXPRESSÃO, CASSETE DE EXPRESSÃO, VETOR DE EXPRESSÃO E SISTEMA DE EXPRESSÃO PARA A PRODUÇÃO CONSTITUTIVA E SECREÇÃO DE PROTEÍNAS HETERÓLOGAS

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Abstract

MÉTODO DE OBTENÇÃO DO VETOR DE EXPRESSÃO, CASSETE DE EXPRESSÃO, VETOR DE EXPRESSÃO E SISTEMA DE EXPRESSÃO PARA A PRODUÇÃO CONSTITUTIVA E SECREÇÃO DE PROTEÍNAS HETERÓLOGAS. A presente invenção trata de um método de obtenção do vetor de expressão pT7BsXA através das etapas (a) inclusão dos sítios de restrição específicos; (b) construção, por evolução dirigida, da biblioteca de variantes com mutações aleatórias na região do promotor por error-prone PCR; (c) construção, por evolução dirigida, da biblioteca de variantes com mutações aleatórias na região de origem de replicação Co1E1 (ori) por error-prone PCR e (d) inserção do gene da proteína de interesse, em particular, enzimas oxidorredutases, transferases, hidrolases, liases, isomerases e/ou ligases. Adicionalmente, o presente pedido refere-se a um cassete de expressão composto por (a) variantes da região promotora BsXA (SEQ ID NO. 12a, SEQ ID NO. 27a, SEQ ID NO. 30a, SEQ ID NO. 32a, SEQ ID NO. 33a, SEQ ID NO. 34a, SEQ ID NO. 38a, SEQ ID NO. 39a e/ou suas combinações obtidas por mutagênese sítio-dirigido, tais como, SEQ ID NO. 40a (RPA), SEQ ID NO. 41a (RPB), SEQ ID NO. 42a (RPAB)), (b) variantes da região de origem de replicação (ori Co1E1) (SEQ ID NO. 50, SEQ ID NO. 60, SEQ ID NO. 70, SEQ ID NO. 80) e (c) um gene de uma proteína de interesse, um vetor de expressão pT7BsXA, obtido através do dito método de obtenção, contendo o cassete de expressão e um sistema de expressão para a produção constitutiva e secreção de proteínas heterólogas, em particular, enzimas oxidorredutases, transferases, hidrolases, liases, isomerases e/ou ligases, preferencialmente, o gene da enzima xilanase A tipo-selvagem (Xy1A) em Escherichia coli.