MÉTODO QUANTIFICADOR DE HDV - VÍRUS DA HEPATITE DELTA

IPC Classification

Abstract

MÉTODO QUANTIFICADOR DE HDV - VÍRUS DA HEPATITE DELTA'. A presente Patente de Invenção refere-se a Método Quantificador de HDV - Vírus da Hepatite Delta, caracterizado por utilizar a transcriptase reversa seguida de PCR, com detecção simultânea por fluorescência gerada a partir da atividade "5'-Endonuclease" da Taq DNA polimerase sobre sondas tipo hidrólise - FAM controladas internamente com sondas de hidrólise - HEX de Controle Endógeno com a quantificação realizada com curva padrão de RNA HDV e analisada por regressão logarítmica ou Carga viral versus Ciclo treshold - CV X Ct, e onde o controle positivo e controle interno foram produzidos através de um sistema de clonagem e a quantificação do controle interno pelo qPCR pela mensuração do tluoróforo HEX, com diluições logarítmicas variando de 1 O milhões a 1.000 cópias/ml., tendo sido desenhado um plasmídeo que contivesse um fragmento do HCV modificado em linha com um fragmento do HDV também modi ficado e após produção in vitro de RNA estabilizado a partir do plasmídeo desenhado, ajustou-se a quantificação do controle interno produzido a partir dos painéis de quantificação existentes para o HCV e extrapolando esta quantificação para o controle interno do HDV e o RNA produzido foi purificado, quantificado e diluído.