PROTEÍNAS DE FUSÃO ENDO-BAX E ENDO-BAX-ENDO E SUAS SEQUÊNCIAS DE AMINOÁCIDOS

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Abstract

PROTEINA DE FUSÃO ENDO-BAX E ENDO-BAX-ENDO E SUAS SEQUÊNCIAS DE AMINOÁCIDOS. A presente invenção refere-se à obtenção de proteínas híbridas baseadas na fusão da endostatina a peptídeos indutores de morte celular. As proteínas de fusão endo-BAX e endo-BAX-endo são compostas de dois domínios funcionais: o primeiro domínio, a endostatina, apresenta especificidade pelas células endoteliais ativadas, utilizado para dirigir a proteína de fusão e permitir sua internalização. O segundo domínio é o peptídeo indutor de morte celular proveniente da região BH3 da proteína BAX, tóxico somente quando internalizado, por desencadear a cadeia de eventos que culminam em morte celular por apoptose. A ptoteína endo-BAX apresenta o domínio pró-apoptótico derivado da proteína BAX fundido no C-terminal da endostatina. Na proteína endo-BAX-endo a segunda (Alfa)-hélice da endostatina foi trocada pela (Alfa)-hélice do peptídeo apoptótico de BAX. Foram construídos os vetores plasmídicos de exprassão pET28-endo- BAX e PET28-endo-BAX-endo, e utilizados para transformação de bactérias E. coli BL21(DE3). A duas proteínas foram produzidas como corpos de inclusão, agregados insolúveis em bactérias E. coli. As proteínas foram renaturadas e purificadas. Os dois híbridos foram eficientemente internalizados pelas células de origem endotelial em proliferação. A presença do domínio BH3 do BAX exerce uma melhoria significativa sobre a atividade ex vivo e in vivo das proteínas mutantes. As proteínas endo-BAX e endo-BAX-endo podem der utilizadas como novos agentes terapêuticos com especificidade para o endotélio tumoral e com ação apoptótica amplificada.